甘油檢測試劑盒的樣本處理方法

甘油是甘油三酯的水解產(chǎn)物。與游離脂肪酸一樣，甘油含量是甘油三酯水解反應(yīng)的可靠檢測指標(biāo)，但檢測更加方便。本試劑盒采用優(yōu)化步驟，能夠檢測實體組織、細(xì)胞中的甘油含量，線性范圍為10-1200µmol/L。原理：在 ATP 存在下甘油被甘油激酶磷酸化為 3-磷酸甘油，再被甘油磷酸氧化酶氧化產(chǎn)生*；在過氧化物酶作用下生色底物轉(zhuǎn)化為苯醌亞胺，其光密度值與甘油濃度成正比。適用范圍：測定實體組織、細(xì)胞中的甘油濃度。

組成 (105 次微板測定或 30 次 1 ml 比色杯測定)：

(1) 裂解液 50 ml

(2) R1 試劑 16 ml

(3) R2 試劑 4 ml

(4) 4 mmol/L 甘油標(biāo)準(zhǔn)品 1 ml4 oC

保存 6 個月有效

所需設(shè)備：酶標(biāo)儀、生化分析儀或 721、722 型可見光分光光度計。最佳工作波長 550nm，如無此波長建議優(yōu)先選用 570nm、次選 530、490nm。

一 組織細(xì)胞裂解細(xì)胞(包括分化的脂肪細(xì)胞)裂解：消化、離心收集細(xì)胞。或直接在培養(yǎng)皿內(nèi)裂解。通常6孔板單孔約2x106個細(xì)胞，75cm2瓶約1x107細(xì)胞。按比例每 1~2 x 106細(xì)胞加 0.1ml 裂解液，震蕩或渦旋裂解后，靜置 10 分鐘。

動物組織裂解：切記要預(yù)先將新鮮組織剪切稱重后再進(jìn)行保存。組織凍存后再進(jìn)行解凍、剪切、稱重可能會產(chǎn)生嚴(yán)重的測量誤差。離心管精確稱重，加入組織塊后再稱重，二者相減(即減量稱重法)計算組織重量(約 100mg)。

強(qiáng)烈建議按比例每 1mg 組織加10µl裂解液以減少樣品間蛋白和脂質(zhì)含量變異而產(chǎn)生的誤差。（注意；裂解液用量在 1ml 或更多可保證有效的裂解與脂質(zhì)提取）。用電動高速勻漿器或手動玻璃勻漿器破碎組織。（不推薦超聲方法，因其不能和均勻破碎。應(yīng)根據(jù)預(yù)實驗調(diào)整初始的組織細(xì)胞加入量），而后，靜置 10 分鐘。

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