丙二醛(MDA)試劑盒基本信息

丙二醛(MDA)是常用的膜脂過氧化指標(biāo)，在酸性和高溫度條件下，可以與硫代酸(TBA)反應(yīng)生成紅棕色的*川(3，5，5—*基惡唑-2，4。二酮)，其zui大吸收波長在532nm。但是測(cè)定植物組織中MDA時(shí)受多種物質(zhì)的干擾，其中zui主要的是可溶性糖，糖與TBA顯色反應(yīng)產(chǎn)物的zui大吸收波長在450nm，但532nm處也有吸收。植物遭受干旱、高溫、低溫等逆境脅迫時(shí)可溶性糖增加，因此測(cè)定植物組織中MDA—TBA反應(yīng)物質(zhì)含量時(shí)一定要排除可溶性糖的干擾。低濃度的鐵離子能夠顯著增加TBA與蔗糖或MDA顯色反應(yīng)物在532、450nm處的消光度值，所以在蔗糖、MDA與TBA顯色反應(yīng)中需一定量的鐵離子，通常植物組織中鐵離子的含量為每克千重100—300ug·g-1，根據(jù)植物樣品量和提取液的體積，加入Fe3+的終濃度為0．5umol·L-1。

丙二醛(MDA)試劑盒檢測(cè)技術(shù)簡介

雙抗體夾心法

　　1.　包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。

　　2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。（同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔）。

　　3.　加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。

　　4.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

　　5.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

　　6.　結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽性。

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補(bǔ)體3a（C3a）試劑盒基本信息

補(bǔ)體(complement，C)是存在于正常人和動(dòng)物血清與 組織液中的一組經(jīng)活化后具有酶活性的蛋白質(zhì)。早在19世紀(jì)末Bordet即證實(shí)，新鮮血液中含有一種不耐熱的成分，可輔助和補(bǔ)充特異性抗體，介導(dǎo)免疫溶菌、溶血作用，故稱為補(bǔ)體。補(bǔ)體是由30余種可溶性蛋白、膜結(jié)合性蛋白和補(bǔ)體受體組成的多分子系統(tǒng)，故稱為補(bǔ)體系統(tǒng)（complement system）。根據(jù)補(bǔ)體系統(tǒng)各成分的生物學(xué)功能，可將其分為補(bǔ)體固有成分、補(bǔ)體調(diào)控成分和補(bǔ)體受體（CR）。

補(bǔ)體3a（C3a）試劑盒的顯色與比色

顯色

　　顯色是ELISA試驗(yàn)中zui后一步溫育反應(yīng)，此時(shí)酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)物。反應(yīng)的溫度和時(shí)間仍是影響顯色的因素。適當(dāng)提高溫度，有助于加速顯色。在一定時(shí)間內(nèi)，陰性孔可保持無色，而陽性孔則隨時(shí)間的延長而呈色加強(qiáng)。在定量檢測(cè)中，加入底物后的反應(yīng)溫度和時(shí)間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確。ELISA顯色結(jié)果通過酶標(biāo)儀進(jìn)行，可減少實(shí)驗(yàn)誤差，提高臨界值樣本的分析準(zhǔn)確度。盡量避免肉眼直接判斷結(jié)果，因?yàn)椴煌瑐€(gè)體的視覺存在差異。應(yīng)注意，加顯色劑時(shí)，要保持顯色劑不外流。加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生較多氣泡，否則可能使假陽性結(jié)果的出現(xiàn)概率增加。

比色

　　比色的方法有目視法和酶標(biāo)比色法2種。目視法簡單明了，但對(duì)同一標(biāo)本，操作者的不同有時(shí)會(huì)出現(xiàn)不同的結(jié)果，具有一定的主觀性。比色的結(jié)果通常用光密度表達(dá)，現(xiàn)按規(guī)定用吸光度表達(dá)。酶標(biāo)儀不應(yīng)安置在陽光或強(qiáng)光照射下，操作時(shí)的適宜室溫在15℃~30℃之間，使用前要先預(yù)熱儀器15~30min，使測(cè)得結(jié)果更為準(zhǔn)確。比色前，應(yīng)先用潔凈的吸水紙擦拭干凈板底附著的液體，然后將板正確放在酶標(biāo)比色儀的比色架上。綜上所述，的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。在實(shí)際應(yīng)用過程中，操作者必須熟練掌握基本操作技能，對(duì)每個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行嚴(yán)格仔細(xì)的核查，盡量避免假陽性和假陰性反應(yīng)的出現(xiàn)，保證檢測(cè)結(jié)果真實(shí)可靠，為診斷和疾病防治提供可靠的理論依據(jù)。

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