所有產(chǎn)品僅供科研使用，不能用于食用和醫(yī)療等

      在研究細(xì)胞時(shí)經(jīng)常要研究細(xì)胞的不同組份，而研究得多的兩個(gè)細(xì)胞組份就是細(xì)胞核和細(xì)胞漿。分離細(xì)胞核蛋白和細(xì)胞漿蛋白，不僅可以用于研究蛋白在細(xì)胞內(nèi)的定位，而且很多時(shí)候分離出來(lái)的核蛋白可以用于轉(zhuǎn)錄調(diào)控方面的研究，例如EMSA(也稱gel shift)，footprinting等。
      細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白抽提試劑盒(Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit)提供了一種比較簡(jiǎn)單、方便的從培養(yǎng)細(xì)胞或新鮮組織中抽提細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白的方法。約90分鐘就可以完成培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白的分離。抽提得到的蛋白可以用于Western，EMSA，footprinting，報(bào)告基因檢測(cè)以及酶活力測(cè)定等后續(xù)操作。

      本試劑盒是通過細(xì)胞漿蛋白抽提試劑A和B，在低滲透壓條件下，使細(xì)胞充分膨脹，然后破壞細(xì)胞膜，釋放出細(xì)胞漿蛋白，然后通過離心得到細(xì)胞核沉淀。后通過高鹽的細(xì)胞核蛋白抽提試劑抽提得到細(xì)胞核蛋白。
     對(duì)于細(xì)胞樣品，如果每個(gè)樣品的數(shù)量不超過二百萬(wàn)個(gè)細(xì)胞，本試劑盒可以抽提50個(gè)樣品；對(duì)于組織樣品，如果每個(gè)樣品的重量不超過30毫克，本試劑盒可以抽提50個(gè)樣品，如果每個(gè)樣品約為30-60毫克，本試劑盒可以抽提37個(gè)樣品。
包裝清單：

保存條件：
      -20℃保存，一年有效。

使用說明：
1. 準(zhǔn)備溶液：室溫融解試劑盒中的三種試劑，溶解后立即放置在冰上，混勻。取適當(dāng)量的細(xì)胞漿蛋白抽提試劑A備用，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的終濃度為1mM。取適當(dāng)量的細(xì)胞核蛋白抽提試劑備用，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的終濃度為1mM。
2. 對(duì)于貼壁細(xì)胞：用PBS洗一遍，用細(xì)胞刮子刮下細(xì)胞，或用EDTA溶液處理細(xì)胞使細(xì)胞不再貼壁很緊，并用移液器吹打下細(xì)胞。離心收集細(xì)胞，盡大努力吸盡上清，留下細(xì)胞沉淀備用。盡量避免用胰酶消化細(xì)胞，以免胰酶降解需抽提的目的蛋白。
3. 對(duì)于懸浮細(xì)胞：用PBS洗一遍，離心收集細(xì)胞，盡大努力吸盡上清，留下細(xì)胞沉淀備用。
4. 每20微升細(xì)胞沉淀加入200微升添加了PMSF的細(xì)胞漿蛋白抽提試劑A。(對(duì)于二百萬(wàn)HeLa細(xì)胞，其細(xì)胞沉淀的體積大約為20微升或40毫克。)
5. 高速劇烈Vortex 5秒，把細(xì)胞沉淀*懸浮并分散開。(如果細(xì)胞沉淀沒有*懸浮并分散開，可以適當(dāng)延長(zhǎng)vortex時(shí)間。)
6. 冰浴10-15分鐘。
7. 加入細(xì)胞漿蛋白抽提試劑B 10微升。高速劇烈Vortex 5秒，冰浴1分鐘。
8. 高速劇烈Vortex 5秒，4℃ 12,000-16,000g離心5分鐘。
9. 立即吸取上清至一預(yù)冷的塑料管中，即為抽提得到的細(xì)胞漿蛋白?？梢粤⒓词褂茫部梢詢龃?。(千萬(wàn)不要觸及沉淀，可以在沉淀上方保留極小體積的上清，以免觸及沉淀。每200萬(wàn)細(xì)胞用200微升本產(chǎn)品中的細(xì)胞漿蛋白抽提試劑A裂解后可獲得的上清，其細(xì)胞漿蛋白濃度約為2-5mg/ml，不同細(xì)胞有所不同。)
10. 對(duì)于沉淀，*吸盡殘余的上清，加入50微升添加了PMSF的細(xì)胞核蛋白抽提試劑。(不吸盡上清會(huì)帶來(lái)細(xì)胞漿蛋白的污染。)
11. 高速劇烈Vortex 15-30秒，把細(xì)胞沉淀*懸浮并分散開。然后放回冰浴中，每隔1-2分鐘再高速劇烈Vortex 15-30秒，共30分鐘。
12. 4℃ 12,000-16,000g離心10分鐘。
13. 立即吸取上清至一預(yù)冷的塑料管中，即為抽提得到的細(xì)胞核蛋白?？梢粤⒓词褂?，也可以-70℃凍存。每200萬(wàn)細(xì)胞用50微升本產(chǎn)品中的細(xì)胞核蛋白抽提試劑裂解后獲得的上清，其細(xì)胞核蛋白濃度約為1.2-3.0mg/ml，不同細(xì)胞有所不同。
14. 對(duì)于新鮮組織：
a. 把組織盡可能切成非常細(xì)小的碎片。按照20:1的比例混合適當(dāng)量的細(xì)胞漿蛋白抽提試劑A和B(例如200微升細(xì)胞漿蛋白抽提試劑A中加入10微升抽提試劑B)。并加入PMSF至終濃度為1mM配制成組織勻漿液。按照每60mg組織加入200微升組織勻漿液的比例混合組織和組織勻漿液(對(duì)于不超過30mg的組織樣品，僅需加入100微升組織勻漿液)，并在玻璃勻漿器內(nèi)充分勻漿。勻漿需在冰浴或4℃進(jìn)行。
b. 勻漿后把勻漿液轉(zhuǎn)移到塑料離心管內(nèi)，冰浴放置15分鐘。
c. 4℃ 1,500g離心5分鐘。把上清轉(zhuǎn)移至一預(yù)冷的塑料管中，為抽提得到的部分細(xì)胞漿蛋白。(吸上清時(shí)千萬(wàn)不要觸及沉淀。)
d. 對(duì)于沉淀，到了這一步已經(jīng)充分勻漿，但很多細(xì)胞還沒有破碎。接下去按照使用說明的步驟4開始操作，即把沉淀當(dāng)做已經(jīng)離心收集好的細(xì)胞沉淀操作，按照步驟4至步驟13抽提得到細(xì)胞漿蛋白和細(xì)胞核蛋白(特別說明：對(duì)于起始量為30-60mg的組織樣品，后續(xù)直接按照步驟4-13操作即可；對(duì)于起始量不超過30mg的組織樣品，后續(xù)步驟4-13中的溶液的用量須減半使用)。抽提得到的細(xì)胞漿蛋白可以和步驟14c中抽提得到的細(xì)胞漿蛋白合并。新鮮的肝臟組織用本產(chǎn)品裂解后獲得的上清，其細(xì)胞漿蛋白濃度約為3-10mg/ml，細(xì)胞核蛋白濃度約為3-10mg/ml，不同狀態(tài)的不同組織有所不同。

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