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活性氧ROS檢測試劑盒（綠色熒光）

1. 本試劑盒特別適用于貼壁細胞和懸浮細胞活性氧的檢測。對于動物組織樣本而言，應盡量選擇新鮮組織，勻漿操作應盡量快速，以減少實驗誤差，如果樣本已經凍存，則無法保證檢測結果的可靠性。

2. DCFH-DA可稀釋于培養(yǎng)基或緩沖液中。血清或培養(yǎng)基的顏色并不會影響DCFH-DA及細胞內熒光的產生，但可能會影響熒光顯微鏡觀察，干擾熒光分光光度計、熒光酶標儀或流式細胞儀的熒光測定。如果用上述儀器進行測定時，可將DCFH-DA稀釋于無酚紅培養(yǎng)基或適宜的緩沖液如PBS中。

3. 加入DCFH-DA的時機和孵育時間，以至能順利檢測細胞內活性氧為目的。當細胞藥物處理時間較短(如<2 小時)或預計ROS效應較弱時，可將DCFH-DA在藥物處理之前或者與藥物同時加入到細胞培養(yǎng)基中；反之，當藥物處理時間較長(如>6小時)或預計產生ROS效應較強時，可將DCFH-DA在藥物處理之后再加入。

4. 活性氧供體內含性價比高12 mM 的H₂O₂。加入細胞后可使DCFH-DA氧化為DCF呈現(xiàn)強綠色熒光。該試劑的細胞工作濃度為20-100 µM或更低濃度，當其濃度超過200µM時，將產生細胞毒性。如果用戶熟悉ROS熒光或實驗沒有必要采用陽性對照，可以不加該試劑。一般情況下，活性氧供體加入到細胞30min左右即可產生明顯的綠色熒光。

活性氧ROS檢測試劑盒（綠色熒光）